ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ АДЬЮВАНТА – АНТИГЕН-НОСИТЕЛЯ. ИЗУЧЕНИЕ ЕГО МЕСТНО-РАЗДРАЖАЮЩЕГО И СЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ
При создании любого нового фармацевтического препарата или средства перед внедрением в производство необходимо провести его доклинические испытания на лабораторных животных, согласно утвержденным ГОСТам, методическим указаниям или санитарным правилам.
Нами разработана полиэлектролитной основе адьювант – антиген-носитель, который будет применяться при производстве вакцин.
Доклинические испытания проводили на базе Испытательного центра ветеринарных препаратов и Клиники СГАУ им. Н.И. Вавилова. Оценивали местно-раздражающее действие на кожу, слизистые оболочки и сенсибилизирующее действие.
Местно-раздражающее и сенсибилизирующее действие на кожу оценивали на лабораторных кроликах, массой 2-3 кг, со светлой кожей.
У кроликов удаляли полностью волосяной покров, методом выстригания ножницами (избегая порезов и ссадин) и последующим выбриванием ручной бритвой, с боковой поверхности тела площадью 8×9 см.
Испытуемые образцы наносили в нативном виде. Время экспозиции составляло до 4 ч.
Образцы наносили два раза в день, в течение двух недель. В конце эксперимента средства смывали. Реакция кожи регистрировалась сразу после окончания экспозиции далее ежедневно в течение 14 дней наблюдений.
Оценивали функционально-морфологические изменения кожи. Оценка эритемы проводилась в баллах согласно общепринятой классификации С.В. Суворова (Табл.1).
Выраженность раздражающего действия
Средний суммарный балл выраженности эритемы и величины отека
Слабое или отсутствие
Исследование сенсибилизирующего действия проводили путем 20 повторных накожных аппликаций на участок боковой поверхности туловища размером 2×2 см по 5 раз в неделю с помощью пипетки по 3 капли. При проведении первого тестирования после 10 аппликаций аллергии не выявили и продолжили нанесение аппликаций до 20. После чего животные были протестированы повторно.
Объективным методом оценки отека кожи служил метод измерения толщины кожной складки (в мм) при помощи инженерного микрометра и переводили в баллы. Баллы суммировали для каждого подопытного животного, после чего вычисляли средний суммарный балл для данной группы экспериментальных животных [2].
Выраженность местно-раздражающего действия адьюванта – антиген-носителя при однократной и многократной аппликации на кожу оценивали в соответствии с классификацией разработанной для фармакологических средств (Табл.1).
За порог раздражающего действия средств на кожу принимается его минимальное разбавление, вызывающее минимальный эффект у животных. Регистрируется также минимальное разбавление вещества, не вызывающее раздражения кожи.
Выраженность раздражающего действия
Средний суммарный балл выраженности эритемы и величины отека
Слабое или отсутствие
При нанесении исследуемых образцов на кожу в нативном виде в результате визуальной оценки состояния кожи и измерения толщины ее складки было отмечено, что адьювант – антиген-носитель для вакцин не вызывает повреждения в виде эритемы или отеков. Его аппликация не вызывает десквамации, аллергической экземы и дерматита. Как во время проведения эксперимента, так и во время наблюдения за животными после смыва средства с места нанесения в течение 14 дней никаких нарушений кожи не отмечали (4 класс).
Местно-раздражающее и аллергизирующее (сенсибилизирующее) действие на слизистые оболочки глаз оценивали на белых лабораторных кроликах, массой 2,5-3 кг.
Исследования проводились в соответствии с Методическими указаниями по оценке аллергизирующих свойств фармакологических веществ [1].
Для постановки конъюктивальной пробы 1 каплю исследуемого образца вводили глазной пипеткой под нижнее веко подопытным и контрольным животным, во второй глаз (контрольный) вводили 1 каплю физиологического раствора.
В первые сутки реакцию учитывали через 15 минут (быстрая реакция), через 30 минут и каждый час в течение первых 6 часов после введения образца.
Эксперимент проводили в течение 30 суток (исследуемые образцы капали в глаза 2 раза в сутки (утром и вечером)) с контролем быстрой реакции.
Реакцию оценивали по следующей шкале: 1 – легкое покраснение слезного протока;
2 – покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице; 3 – покраснение всей конъюнктивы и склеры.
В ходе эксперимента наблюдали:
- нормальное состояние сосудов (не расширены) века, бульбарной конъюнктивы, слезных протоков, склеры и роговицы;
- гиперемии, отека век и выделений из глаз не наблюдали;
- покраснений и отека слезного протока, конъюнктивы и склеры не наблюдали;
- так же не наблюдали и помутнений роговицы.
Экспериментальные данные свидетельствуют об отсутствии аллергенных свойствадьюванта – антиген- носителя.
Класс по раздражающему действию оценивали по классификации выраженности раздражающих свойств (Табл.2).