К вопросу о референсных границах сывороточной концентрации опухолевого маркера HE4

Муратова Гульсияр Зуфаровна — старший преподаватель кафедры естественных и физико-математических наук подготовительного факультета для иностранных учащихся, тел. +7-917-264-16-24, e-mail: gulsijar@mail.ru

Мазитов Булат Камильевич — заведующий диспансерно-профилактическим отделением, тел. (843) 519-26-87, e-mail: bmazitov@gmail.com

Хасанов Рустем Шамильевич — доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой онкологии и хирургии, директор Приволжского филиала РОНЦ им. Н.Н. Блохина, тел. (843) 519-26-00, e-mail: priemnaya.rkod@mail.ru

Проведено изучение распределения сывороточной концентрации маркера НЕ4 (Human epididymis protein 4) у здоровых женщин Поволжского региона России и определение верхней границы референсного интервала для этой популяции. В исследуемую группу включено 90 здоровых женщин — работниц одного из предприятий Казани. Возраст участниц исследования был от 23 до 64 лет. Из 90 женщин 64 (71%) были в пременопаузе и 26 (29%) — в постменопаузе. Сывороточную концентрацию HE4 определяли в день забора методом хемилюминесцентного иммунологического анализа на микрочастицах (CMIA) на анализаторе Abbott Architect i2000SR (Abbot Diagnostics, Abbot Park, IL). Среднее значение сывороточной концентрации HE4 (±стандартная ошибка среднего) составило 28,4 (±0,6) пмоль/л, минимальное значение — 14,9 пмоль/л, максимальное — 45,1 пмоль/л, медиана — 28,05 пмоль/л. Верхняя граница 95%-го референсного интервала соответствовала 41,2 (90% доверительный интервал: 40,2-44,3) пмоль/л. Таким образом, референсные границы сывороточной концентрации опухолевого маркера НЕ4 для здоровых женщин Поволжского региона России намного ниже нормативов, рекомендованных производителем. Необходимы дополнительные исследования с включением здоровых женщин всех возрастных групп с последующей валидацией полученных референсных границ в исследованиях с включением больных с доброкачественными и злокачественными опухолями.

Ключевые слова: опухолевый маркер НЕ4, рак яичников, референсный интервал.

M.S. KATSYUBA 1,2 , G.A. USMANOVA 2 , G.Z. MURATOVA 3 , B.K. MAZITOV 2 , R.Sh. KHASANOV 1,2

1 Kazan State Medical Academy, 36 Butlerov St., Kazan, Russian Federation, 420012

2 Tatarstan Cancer Center, the Volga branch of Russian Cancer Research Center named after N.N. Blokhin, 29 Sibirskiy Trakt St., Kazan, Russian Federation, 420029

3 Kazan (Volga region) Federal University, 18 Kremlevskaya St., Kazan, Russian Federation, 420061

Katsyuba M.S. — Assistant of the Department of Oncology and Surgery, tel. (843) 296-95-03, e-mail: mkatsuba@mail.ru

Usmanova G.A. — Head of immunologic laboratory, tel. (843) 519-27-61, e-mail: RKOD.ImmLab@tatar.ru

Muratova G.Z. — Senior Lecturer of the Department of Natural and Physical and Mathematical Sciences of the preparatory faculty for foreign students, tel. +7-917-264-16-24, e-mail: gulsijar@mail.ru

Mazitov B.K. — Head of the dispensary and preventive Department, tel. (843) 519-26-87, e-mail: bmazitov@gmail.com

Khasanov R.Sh. — D. Med. Sc., Professor, Head of the Department of Oncology and Surgery, Director of the Volga branch of Russian Cancer Research Center named after N.N. Blokhin, tel. (843) 519-26-00, e-mail: priemnaya.rkod@mail.ru

There was studied the distribution of serum concentration of HE4 (Human epididymis protein 4) tumor marker in healthy women of the Volga Region in Russia and determined the upper limit of the reference range for this population. The studied group consisted of 90 women — employees of a public enterprise in Kazan, Russia. Age of the studied participants was 23 to 64 years. 64 of 90 (71%) were premenopausal woman and 26 (29%) — postmenopausal women. HE4 serum concentrations was determined on the date of sampling using Chemiluminescent microparticle immunoassay (CMIA) on an analyzer Abbott Architect i2000SR (Abbot Diagnostics, Abbot Park, IL). Mean HE4 serum concentrations (± SEM) were 28,4 (± 0,6) pmol / l, the minimum value — 14.9 pmol / L, maximum — 45.1 pmol / l, the median — 28.05 pmol / l. The upper limit of the 95% reference interval corresponded to 41.2 (90% CI: 40.2-44.3) pmol/L. Therefore, reference limits of the HE4 protein tumor marker for healthy women of the Volga Region in Russia were detected to be much lower than recommended by the manufacturer. Additional studies are required to include healthy women of all age groups, followed by validation of reference boundaries in studies with the inclusion of patients with benign and malignant tumors.

Key words: HE4 tumor marker; ovarian cancer; reference range.

Рак яичников лидирует в структуре смертности от злокачественных новообразований (ЗНО) женских гениталий. В 2012 г. в России зарегистрировано 12935 новых случаев ЗНО яичников и 7789 смертей от этой болезни. Кумулятивный риск заболеть ЗНО яичников на протяжении жизни для женщин России составил 1,19% [1]. С некоторыми допущениями это означает, что на протяжении жизни заболеть суждено 1 женщине из 84. В развитых странах, в том числе в России, около 90% ЗНО яичников приходится на эпителиальные опухоли (карциномы), которые характеризуются агрессивным течением, склонностью к диссеминации процесса и низкими показателями пятилетней выживаемости. Известно, что судьба пациентки с раком яичников сильно зависит от стадии заболевания, а также от того, кто будет осуществлять лечение ее болезни. Так, многочисленными исследованиями показано, что пациентки, кому первичное хирургическое вмешательство выполнено специалистом-онкогинекологом и в специализированном центре, имеют большую продолжительность жизни и меньше страдают от осложнений лечения по сравнению с теми, кого оперировали в общей лечебной сети [2-6].

Вместе с тем объемные образования в области придатков матки на протяжении жизни диагностируются у 10-20% женщин [7, 8]. Соответственно, большая часть из них оперируется в «общегинекологических» (не онкологических) отделениях. Кроме того, определенная часть пациенток с объемными образованиями в области придатков матки подвергается динамическому наблюдению либо консервативному лечению. Ошибочный выбор такой тактики при наличии злокачественной опухоли может обернуться настоящей трагедией. Поэтому, очень важно правильно предсказать вероятность обнаружения рака у пациентки с объемным образованием в области придатков матки, как для того, чтобы решить — куда направить ее на операцию: в «общегинекологический» или онкогинекологический стационар, так и для того, чтобы ошибочно не избрать выжидательную тактику.

С этой целью традиционно используется сывороточный опухолевый маркер СА125. Однако при I стадии заболевания его чувствительность не превышает 50% [9, 10]. Кроме того, этот маркер часто оказывается ложно позитивным при доброкачественных опухолях и неопухолевых заболеваниях, таких как эндометриоз, воспалительные заболевания органов малого таза, а также полисерозитах любой этиологии и при многих других ситуациях [9-12].

В этой связи представляет интерес новый сывороточный опухолевый маркер HE4 (Human epididymis protein 4), известный также как WFDC2. Достоинством этого маркера является его высокая специфичность для диагностики рака яичников. В отличие от СА125, он не повышается при эндометриозе, воспалении, большинстве доброкачественных и экстрагенитальных опухолей [9, 13-15, 16]. Кроме того, около половины случаев рака яичников с нормальной концентрацией СА125 сопровождается повышением сывороточной концентрации НЕ4 [17, 18]. Однако, до сих пор не определены международные нормативы сывороточной концентрации НЕ4. Принято считать, что для «ручного» метода иммуноферментного анализа (ИФА) НЕ4 EIA (CanAg, Fujirebio Diagnostics) дискриминационный уровень соответствует 150 пмоль/л независимо от менопаузального статуса, а для автоматизированного Architect HE4 assay (Abbott Diagnostics, Abbot Park, IL) — 70 пмоль/л для пременопаузальных и 140 пмоль/л для постменопаузальных женщин [9, 16, 19, 20]. Между тем в инструкциях производителей не содержится однозначных указаний считать приведенные выше концентрации дискриминационным уровнем. При этом производители рекомендуют каждой лаборатории установить свои собственные референсные интервалы для обследуемой популяции [21, 22]. Многие исследователи предлагают референсные границы намного ниже, чем в инструкции производителей [19, 23, 24]. Кроме того, опубликованы данные, свидетельствующие о том, что референсные интервалы могут существенно различаться в зависимости от исследуемой популяции [19]. В то время как наиболее масштабные исследования концентрации НЕ4 у здоровых женщин проведены на азиатских (Малайзия, Корея, Китай) [20, 23] и скандинавской [24] популяциях, нами не найдено публикаций, содержащих подобную информацию о российской референсной популяции.

Цель исследования — изучение распределения концентрации опухолевого маркера НЕ4 у здоровых женщин Поволжского региона России и определение референсного интервала для этой популяции.

Материалы и методы

Проведен профилактический осмотр 91 сотрудницы одного из предприятий Казани. Все женщины были осмотрены терапевтом, гинекологом (с забором мазков с шейки матки на онкоцитологическое исследование) и маммологом. Им было проведено также трансвагинальное ультразвуковое исследование (УЗИ) малого таза, УЗИ молочных желез или маммография. Критериями исключения были ситуации, которые могли бы привести к значительному повышению сывороточной концентрации НЕ4: злокачественные опухоли любой локализации, как обнаруженные на момент исследования, так и в анамнезе, любые опухоли яичников, обнаруженные на момент исследования, а также заболевания, сопровождающиеся сердечной или почечной недостаточностью. Соответственно этим критериям из исследования были исключена 1 женщина, в прошлом перенесшая лечение по поводу рака сигмовидной кишки. Ни у одной из участниц при комплексном обследовании не было обнаружено опухолевого поражения яичников, злокачественных опухолей других локализаций, заболеваний, сопровождающихся сердечной или почечной недостаточностью. Таким образом, в исследуемую группу вошло 90 женщин. Все женщины заполнили анкету, где указали дату последней менструации, характер менструальной функции, перенесенные заболевания и гинекологические операции. Кроме того, изучены записи в медицинской документации, выполненные гинекологом, маммологом и терапевтом, протоколы УЗИ.

Кровь на исследование забиралась натощак в вакутейнер. Сыворотку получали путем центрифугирования образцов при скорости 1500 оборотов в минуту в течение 10 минут. Сывороточную концентрацию HE4 определяли в день забора методом хемилюминесцентного иммунологического анализа на микрочастицах (CMIA) на анализаторе Abbott Architect i2000SR (Abbot Diagnostics, Abbot Park, IL) в строгом соответствии с инструкцией производителя.

Вся группа (n=90) была разделена на подгруппы двумя способами: по возрасту (до 45 лет/от 45 и старше) и по менопаузальному статусу. Разделение по менопаузальному статусу проводилось на основании анкетирования и анамнестических данных по тому же принципу, как принято при вычислении индекса ROMA (Risk of Malignacy index) [25]. То есть постменопаузальными считались женщины, у которых прошло не менее года с даты последней менструации либо был известен факт двухсторонней овариоэктомии. Все остальные участницы рассматривались как пременопаузальные.

Статистический анализ проводили при помощи MS Excel и MedCalc Version 14.8.1. Для определения характера распределения использовался критерий Колмогорова — Смирнова. Для описания распределения концентрации НЕ4 в группе и подгруппах вычислялись следующие описательные статистики: среднее, стандартное отклонение, медиана, минимум, максимум, размах выборки, 25-й и 75-й процентили, коэффициент асимметрии, эксцесс. Поскольку концентрация HE4 не была нормально распределена, использовались непараметрические методы. Различия между подгруппами анализировались при помощи критерия Манна — Уитни. С целью оценки референсных границ вычислялись 95-й, 97,5-й и 99-й процентили с 90%-ным доверительным интервалом (90% ДИ) согласно рекомендациям Международной федерации клинической химии и лабораторной медицины (IFCC) и Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) [26]. Нижняя граница референсного интервала не определялась, как не имеющая клинического значения.

Результаты

Возраст участниц исследования был от 23 до 64 лет (средний возраст составил 42,2 года). В возрасте от 23 до 34 лет было 30 участниц, от 35 до 44 лет — 17, от 45 до 54 лет — 19, от 55 до 64 — 14 женщин. При этом только 2 участницы были старше 60 лет. Из 90 женщин 64 (71%) были в пременопаузе и 26 (29%) — в постменопаузе.

Таблица 1.

Статистические характеристики, отражающие распределение сывороточной концентрации НЕ4 (пмоль/л)